收到细胞后，静置3小时，然后当天更换新鲜培养基！！！原瓶培养基不能继续使
用！！！该细胞订单用户订购前，需核实确认。
培养基货号DMEM(HYCLONESH30022.01或GIBCOC11965500BT）
胎牛血清（GIBCO10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产
生售后问题，不予支持补发。培养基正常pH值为7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需
要尽快更换完全培养基。
冻存细胞收货注意事项：
收到细胞后，当天存入-80℃冰箱或者-196℃的液氮罐中保存！！！该细胞订单用户订购前，需核实确认
（冻存细胞以收到细胞后起14天之内为售后保障期，不是保存多日开始复苏后的14天之内）
培养基货号DMEM(HYCLONESH30022.01或GIBCOC11965500BT）
胎牛血清（GIBCO10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产
生售后问题，不予支持补发。培养基正常pH值为7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需
要尽快更换完全培养基。
常见问题：
1.运输途中，细胞会因为晃动造成细胞脱落，此现象为正常现象，观察后，静置3小时。
2.传代后细胞漂浮原因：传代前密度过大导致细胞挤出凋亡；消化过度；移液枪吹打力道过大。
3.细胞复苏后贴壁性不好，尝试换液并血清提至15%，待观察，若效果还不佳，需要联系销售及技术老师。
4.本产品有添加支原体抗污染剂及三抗（青霉素，链霉素，两性霉素B），若收到细胞后2天内，发现细
胞污染，请立即联系对应销售进行补发；3-14天之内的污染，需要联系对应销售沟通并且核实详情后，进
行下一步售后处理。细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）
实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，水浴锅，离心机
实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，三抗
实验材料：T25细胞培养瓶，需复苏的细胞，移液枪，枪头，离心管
实验步骤：
1.从液氮罐中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
2.从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，移液枪吸出细胞悬液，加到离心管并滴加5倍以上完全培养
基并混匀。
3.操作离心，调至1000转/分，时长10分钟
4.弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，在T25培养瓶中加入5-6ml完全培养基，计数，调整细胞
密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。
5.次日更换一次培养液，继续培养。
6.注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个T25培养瓶中
细胞传代操作说明（贴壁细胞）
实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心机
实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗
实验材料：T25细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管
实验步骤：
1.细胞于培养箱中，愈合度达到80%，可进行传代。
2.按T25培养瓶计，吸出完全培养基，并PBS缓冲液轻冲3遍，添加0.25%含EDTA胰酶2ml，
消化2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min离心10min，弃
上清收集细胞，铺至2个T25培养瓶中培养，各添加7ml完全培养基。
3.注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不
可继续使用（终止消化或传代）。细胞传代操作说明（悬浮细胞）
实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心机
实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，三抗
实验材料：T25细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管
实验步骤：
1.细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。
2.按T25培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min离心10min，弃上清收集细胞，铺至2个
T25培养瓶中培养，各添加7ml完全培养基。
3.注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。
细胞冻存操作说明
实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心机
实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗，DMSO
实验材料：T25细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头，离心管，冻存管，记号笔
实验步骤：
1.取待冻存的细胞（按T25计）用0.25EDTA胰酶2ml消化2min，用完全培养基将细胞冲洗下来。
1000r/min离心10min，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。
2.加入1ml冻存液(90%FBS+10%DMSO)制成细胞悬液。
3.细胞悬液装入3支冻存管中。
4.冻存管在4℃下存放30min，转放-20℃1.5～2h，再转人-70℃4-12h后即可转移到液氮内(-196℃)，并登记。